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翊圣T4 DNA ligase,片段连接更高效

——快速高效的DNA连接酶

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产品原理


DNA 连接酶是一种能够催化相邻DNA 的3’-OH 和5’- 磷酸基末段形成磷酸二酯键,并且把两段DNA 拼接起来的核酸酶。T4 Ligase是目前应用比较多的病毒基因组编码的DNA 连接酶,主要从缺失型嗜菌体中提取,噬菌体T4 的30 基因是该酶的合成基因。T4 DNA连接酶在分子生物学中有广泛的应用。

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产品简介


在普通T4 DNA连接酶的基础上,利用定向改造技术,将T4 DNA ligase的有效催化活性结构域通过多轮突变筛选,得到一种连接活性更强的突变体。采用最高纯度的生产标准和严格的质量检测,有效去除核酸酶、切口酶的残留,连接时间只需15min,打造一款快速高效的DNA连接酶。


产品应用


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产品特点


1. 应用更广泛:可催化粘性末端和平末端形成磷酸二脂键

2. 适用于多种样本:包括FFPE、cfDNA等在内的所有样本均能高效连接

3. 适用于多种类型片段连接:兼容illumina平台Y型接头以及MGI平台Bubble接头片段

4. 严格质控:严格的批次性能与稳定性质控


原料质控标准


核酸内切酶残留质控:2000 U的本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74℃下反应1小时,DNA电泳谱带不发生变化。

核酸外切酶残留质控:2000 U的本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74℃下反应1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。


连接效率测评


将本产品用于NGS建库接头连接模块,样本为模式样本cfDNA模拟品,加入Y型建库接头,连接之后经Agilent 2100检测,理论上会出现三个峰:

① 双端均未连接接头片段;② 仅一端连接接头片段;③ 双端均连接接头片段

而在二代测序文库构建中,只有双端都连接接头的片段才是合格可用的文库,因而通常可以通过双端均连接接头的片段占比反应接头连接效率。即双端连接接头片段占比越高,单端连接以及无接头连接的片段占比越低,连接效率越高。

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*峰指认:①未连接接头  ②单端连接接头  ③双端连接接头

*样本制备:使用170 bp多重PCR产物作为cfDNA模拟品,该PCR产物经过设计,3’端含有所有碱基的组合(共16种)。


可应用于MGI/Illumina平台文库构建中接头连接


样本类型:FFPEcfDNA、肠道微生物 

对比竞品:N*品牌 T4 DNA Ligase

测序平台:illumina® 以及MGI®

实验结果:Fast T4 DNA Ligase在不同样本类型中的连接效率高于N*

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应用反馈


将本品应用于NGS建库试剂盒中(Cat#12199),经过不同条件建库验证,相比于竞品K*品牌均能获得更高的文库产出。

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【注】样本来源:Calf thymus Fragment DNA


产品信息


名称

货号

规格

Hieff® Fast T4 DNA Ligase (400 U/µL)

10299ES40

40 KU

Hieff® Gold T4 DNA Ligase (5 U/µL)

10300ES80/97

1/50 KU

Hieff® Quick T4 DNA Ligase (400 U/µL)

10301ES40

40 KU


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翊圣生物成立于2009年,是致力于分子酶创新研发的国家高新技术企业,总部位于上海市浦东新区国际医学园区。公司围绕“解析分子酶结构与功能,拓展分子酶应用场景,解决生命科学领域与精准医疗领域试剂核心问题”为重点,开发分子生物学,高通量测序,细胞生物学及体外诊断相关的酶原料与试剂。秉承客户至上,合作分享,诚信务实,创新奉献的价值观,踏实服务于生命科学以及精准医疗领域。